转基因一直是一个饱受争议的话题，那么转基因是如何实现的呢？
实现这一精确的操作过程至少需要三种工具，即准确切割DNA的“手术刀”、将DNA片段再连接起来的“缝合针”、将体外重组好的DNA导入受体细胞的“运输工具”。
考点：
可以对DNA进行切割的“分子手术刀”：限制性核酸内切酶
切割DNA的工具是限制性核酸内切酶又称限制酶，这种酶主要是从原核生物中分离，纯化出来的，它能够识别双链DNA分子的某种特定核酸序列定时每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开。
DNA分子经过限制酶切割后产生的DNA便拓牧专东场有两种种形式——黏性末端和平末端。
当限制酶在它识别序列的中轴线两侧将DNA的两条链分别切开时，产生的是黏性末端，而当限制酶在它识别序列的中轴线处切开时，产生的平末端。
可以将DNA片段缝合起来的“分子缝合针”：DNA连接酶
我们学习的两类DNA连接酶：一类是从大肠杆菌中分离得到的称为E·coliDNA连接酶，另一类是从t4噬菌体中分离出来的称为t4DNA连接酶。
这两类酶作用的差别是E·coliDNA连接酶只能将双链DNA片段互补的磷酸二酯键的黏性末端连接起来，不能将双链DNA片段平末端连接起来。
而t4DNA连既可以缝合双链DNA片段片段互补的黏性末端又可以缝合双链DNA片段的平末端，但连接平末端之间的效率比较低。
例题：
1、有关基因工程的叙述中，错误的是（）。
A.DNA连接酶将黏性末端的碱基对连接起来
B.限制性核酸内切酶可用于目的基因的获得
C.目的基因可由运载体导入受体细胞
D.人工合成目的基因时不用限制性核酸内切酶
A项，DNA连接酶将黏性末端的磷酸和脱氧核糖连接起来，形成磷酸二酯键，故A项叙述错误。B项，限制酶能够识别特定核苷酸序列，从目的基因所在DNA上切割获取目的基因，故B项叙述正确。C项，目的基因要通过载体导入受体细胞，故C项叙述正确。D项，人工合成目的基因可以根据已知目的基因序列或mRNA序列人工合成，不使用限制性核酸内切酶，故D项叙述正确。故本题正确答案为A。
2、判断下列有关基因工程和酶的相关叙述，正确的是（）。
A.限制酶不能切割烟草花叶病毒的核酸
B.载体的化学本质与载体蛋白相同
C.同种限制酶既可以切割目的基因又可以切割质粒，因此不具备专一性
D.DNA连接酶可催化脱氧核苷酸链间形成氢键
A项，限制酶是DNA内切酶，烟草花叶病毒是RNA病毒，酶有专一性，因此不能切割烟草花叶病毒的核酸，故A项正确。B项，基因工程的载体有质粒、噬菌体和动植物病毒，细胞膜运输载体是蛋白质，化学本质不相同，故B项错误。C项，同种限制酶既可以切割目的基因又可以切割质粒，但识别的都是相同的核苷酸序列并且在相同的切点作用，仍然体现了酶的专一性，故C项错误。D项，DNA连接酶可催化DNA片段间形成磷酸二酯键，故D项错误。综上所述，本题正确答案为A。
3、下图示一种质粒和人的胰岛素基因，其中a表示标记基因，b表示胰岛素基因，E1表示某限制性核酸内切酶的酶切位点。现用该种限制性核酸内切酶分别切割质粒和胰岛素基因，后用DNA连接酶连接切割后的质粒和胰岛素基因，不可能出现的是（）。
A.A
B.B
C.C
D.D
具有互补配对末端的DNA在DNA连接酶的作用下可以被连接。被切断的质粒之间相互连接会出现A，质粒和目的基因连接会出现B，质粒两端自我连接会出现D，不可能出现C，故本题正确答案为C。