己糖激酶(Hexokinase,HK,EC2.7.1.1)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,是葡萄糖分解过程中的第一个关键酶,催化葡萄糖转化为6-磷酸葡萄糖,6-磷酸葡萄糖是糖酵解和磷酸戊糖途径的交叉点。HK催化葡萄糖合成6-磷酸葡萄糖,6-磷酸葡萄糖脱氢酶进一步催化6-磷酸葡萄糖脱氢生成NADPH,NADPH在nm有特征吸收峰。
(一)概况
1.反应式
最适pH值为7.5。
2.米氏常数
3.专一性
酵母来源的己糖激酶对许多D-己糖类化合物皆有活性,其作用的相对速度(以葡萄糖为1)是:D-果糖为18,D-甘露糖为0.8,D-葡糖胺为0.7,2-脱氧葡糖为1.0,D-半乳糖则小于0.。牛脑来源的此酶活性与酵母酶相似。γGT对于a-异构体糖类更易起反应。ATP是最佳的磷酸供体,其相对速度为1.0,而其它化合物的反应速度则按下列顺序:2-脱氧-5-三磷酸腺苷(dATP)为0.5,5-三磷酸肌苷(ITP)为0.03,5-三磷酸尿苷(UTP)为,5-三磷酸胞苷(CTP)为0.等。
4.激活剂与抑制剂
Mg2+离子为必需的激活剂,EDTA与SH阻滞剂为抑制剂。
5.所需纯度
所需的纯度应为每毫克蛋白含单位以上,混杂的磷酸葡糖异构酶量应少于0.1%,而且所含葡糖-6-磷酸脱氢酶(G-6PDH)、肌激酶以及6-磷酸甘油酸脱氢酶(6-PGDH)的量亦应少于0.01%。
6.临床意义
此酶可用来测定葡萄糖、果糖、甘露糖以及ATP。在所有生物细胞内进行的呼吸作用与发酵作用过程中,己糖激酶则是一个关键性的酶。
7.稳定性
此酶是很稳定的,将它保存4℃下,经12个月之久未发现其活性有任何丧失。
二、测定方法
1.分光光度法
己糖激酶既可用分光光度法进行测定,即借助与葡糖-6-磷酸脱氢酶相偶连的反应来测定,在nm处测量吸光率的增量。
2.荧光法
己糖激酶也可用荧光法进行测定,即借助与葡糖-6-磷酸脱氢酶相偶连的反应来测定,或者在激发波长nm、发射波长nm处测量NADPH的荧光度的增量。