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TUhjnbcbe - 2023/4/12 20:47:00
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异柠檬酸脱氢酶又称苏-Ds-异柠檬酸:NADP氧化还原酶(脱羧);ICDH;EC.1.1.1.42)。异柠檬酸脱氢酶ICDHc(EC1.1.1.42)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,催化异柠檬酸脱氢脱羧生成α-酮戊二酸,同时还原NADP+生成NADPH。ICDHc是细胞质中除了磷酸戊糖途径外又一种NADPH重要来源,在逆境中该酶活性通常会发生显著变化。

一、概况

1.反应式

2.米氏常数

3.专一性

猪心的异柠檬酸脱氢酶也能催化草酰琥珀酸还原为异柠檬酸,进而生成a-酮戊二酸。在无辅助因子存在下,当pH值为5.6时,草酰琥珀酸被催化还原为a-酮戊二酸的速度,相当于三倍的还原成异柠檬酸的速度。

上述反应式中,不能用NAD代替NADP。L-异柠檬酸与顺式-乌头酸不能作为底物。

4.抑制剂与激活剂

Mn2+离子是必不可少的激活剂,其最适浓度为2~4毫克分子浓度,Mg2+亦具有激活作用。异柠檬酸是竞争性抑制剂;F-离子及重金属离子与SH结合试剂一样具有抑制作用。

5.纯度要求

所需的纯度至少为每毫克蛋白含2单位活性,而含NAD专一的异柠檬酸脱氢酶量应少于0.2%。

6.意义

异柠檬酸脱氢酶存在于机体各组织中;若血清中此酶活性上升,则几乎可认为是肝病特征。

此酶在血清中的正常水平为7毫单位/毫升;而成年人活性范围为1~4毫单位/毫升;婴儿的活性范围为3~8毫单位/毫升。病*性肝炎病人在患病第一周期间内,发现此酶活性较正常水平增加若干倍。患恶性肝肿瘤病人,则此酶活性会出现显著的上升。然而,对于肝硬化或心肌梗塞患者,此酶活性却无明显的上升。

此酶亦可作为测定异柠檬酸的分析试剂。

7.稳定性

将此酶保存在50%的甘油溶液中,于4℃下,能稳定几个月。在血液中,于4℃下经一天时间,此酶会丧失10%左右的活性。

二、测定方法

1.分光光度法

测定此酶的最常用方法是基于nm处测量NADPH吸光率增量的原理。将吸光率变化的速度(吸光率差值/分)乘以某一系数(30℃下于nm处为),则得出此酶活性(毫单位/毫升)。该方法的变异系数约为10%。

另外,还可采用2,4-二硝基苯腙的方法,即于最大吸收波长~nm处,测量a-酮戊二酸-腙的吸光率。由校准坐标曲线上可测定出此酶活性,其变异系数为3.6%。

2.荧光法

根据上述紫外测定NADPH的原理,亦可适用于异柠檬酸脱氢酶(ICDH)的荧光法测定。可分别于激发波长m处(汞发射的光线)及发射波长nm处连续地跟踪NADPH的荧光度。此测定方法可达到相当大的灵敏度。

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