什么是DNA测序
DNA测序是一种用于测定特定DNA分子的核苷酸序列的实验室技术。它使用荧光标记的核苷酸，这些核苷酸在PCR过程中掺入。基于荧光检测技术，有两种主要的测序方法：Sanger测序和二代测序。
DNA测序如何工作
在DNA测序过程中，荧光标记的核苷酸通过PCR添加到特定的DNA片段中。对于DNA链的伸长，使用常规脱氧核苷酸（dNTP）。然而，ddNTPs被添加到反应混合物中，该混合物是荧光标记的。由于ddNTP在脱氧核糖分子中没有3′OH基团，因此可能不会发生进一步的链生长，从而终止链生长。DNA的糖磷酸骨架是由脱氧核糖的3′OH基团和进入核苷酸的磷酸基团之间的磷酸二酯键形成的。然而，ddNTPs以低浓度添加;因此，它们不会立即终止链条增长。
将四种类型的ddNTP添加到四种单独的PCR混合物中。通过添加ddATP，ddGTP，ddCTP和ddTTP进行四种独立的PCR反应。因此，在每个反应混合物中，链生长分别终止于A，G，C和T核苷酸。例如，在加入ddATP的反应混合物中，不同扩增子的生长终止于DNA片段中的每个A核苷酸处。通过Sanger测序测定DNA序列如图2所示。
四种类型的核苷酸中的每一种都用单独的荧光颜色标记;ddATP用绿色染料标记;ddGTP用黄色染料标记;ddCTP用蓝色标记;ddTTP用红色染料标记。因此，四个PCR反应的扩增子以不同的颜色标记。
在扩增感兴趣的DNA片段后，通过凝胶电泳或毛细管电泳分离扩增子。DNA片段的核苷酸序列可以通过检测发射荧光来确定。通过Sanger测序，每次运行都可以轻松确定-1，个碱基对长片段的核苷酸序列。然而，由于基因组中存在大量核苷酸，全基因组核苷酸序列的测定仍然具有挑战性。然而，下一代测序技术如测序，每次运行可以读取约2万个碱基对。
结论
DNA测序是一种分子生物学技术，用于测定DNA片段的核苷酸序列。在测序过程中，荧光标记的核苷酸通过PCR添加到DNA片段中。通过检测发射荧光，可以确定核苷酸序列。
