多肽合成中的常用修饰amp标记知识汇 [复制链接]

多肽标记及修饰的内容很多，广泛应用在多肽yào物，多肽生物学，多肽抗体以及多肽试剂的研究中。目前应用广泛的有：生物素标记，荧光标记（FAM，FITC等），磷酸化修饰等。

1.

生物素标记

生物素-亲和素系统(biotin-avidinsystem，BAS)，它是一种新型的生物反应增强系统，应用于免疫学，在20世纪70年代末得到迅速发展。由于其生物素与亲和力之间的高亲和力和多级强化效应，以及与荧光素、酶和同位素等免疫分析技术有机结合，各种微量免疫解分析的特异性和敏感性得到进一步tí高。主要有用于标记多肽氨基的生物素N-羟基丁二酰亚胺酯(BNHS)和生物素对硝基酚酯(pBNP)，其中以BNHS常用，当然，生物素也可以直接标记，因为它有一个游离的羧基在其结构；采用HBTU/HOBt/NMM方法缩合（由于生物素的溶解度低，使用DMSO/DMF的混合溶剂增加溶解度）。

2.

荧光标记

荧光标记操作简单，并且没有放射性。因此，荧光标记在生物学研究中得到了广泛的应用，荧光标记方法与荧光试剂的结构有关，用于游离羧基的方法与多肽缩合反应相同，也采用HBTU/HOBt/NMM方法缩合。N标记的FITC肽经过循环效应形成荧光素，通常伴有去除zuì后一种氨基酸，但是当有间隔剂，或目标肽被非酸性环境从树脂中切断时，可以避免。

3.

磷酸肽合成

磷酸肽在生命过程中起着重要作用，磷酸化位于这些多肽上Ser，Thr，Tyr。目前磷酸肽合成一般都采用磷酸化氨基酸。磷酸化氨基酸的连接一般采用HBTU/HOBt/NMM方法。然而，目前使用这种方法合成磷酸化也有异议，特别是在合成多磷酸盐多肽或长肽时，连接效率低，zuì终产品纯度很低，对于这种磷酸盐多肽，我们考虑采用磷酸化后法，合成过程是在多肽合成后，有选择地去脱除氨基酸侧链保护基础。对于Tyr，Thr可以直接使用侧链不保护的氨基酸进行反应，而Ser可以采用Fmoc-Ser（trt），在1%TFA/DCM条件下可以定量的脱除。后磷酸化，采用双苄基亚磷酰胺，四氮唑生成亚磷酰胺四唑活性中间体，连接到羟基上，随后在过氧酸下氧化生成磷酰基，完成反应。

常用修饰和标记

N端标记或修饰、N端乙酰化（AC）、N端生物素标记（Biotin）、C-端生物素标记(用赖氨酸侧链连接)、C-FITC(用赖氨酸侧链连接)、二硫键环肽（S-S）、多肽shǒu尾酰胺环、Lys(Me),Lys(Me2),Lys(Me3)、MAP复合抗原肽等。