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葡萄糖和ATP测定丨Worthingto [复制链接]

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葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)是一种调节酶,催化戊糖磷酸途径的步:使用NADP+和/或NAD+氧化葡萄糖-6-磷酸。

L.mesenteroides的G6PD因其独特的双辅酶特异性而得到了非常详细的研究。大多数脱氢酶更喜欢NAD+或NADP+,但L.mesenteroidesG6PD都可以使用。

艾美捷Worthington葡萄糖-6-磷酸脱氢酶特异性:

NAD或NADP都可以作为辅酶,NAD的内在反应速度大约是NADP的1.8倍(Olive和Levy)。D-葡萄糖-6-磷酸被认为是天然底物,尽管D-葡萄糖反应缓慢(Metzgeretal.)。

Asp和His形成G6PD的催化二元组。His作为从6-磷酸葡萄糖中提取C-1质子的碱基;Asp稳定产生的正电荷(Cosgroveetal.)。

作品:

L.mesenteroidesG6PD是相同亚基的二聚体,每个二聚体有两个活性位点,假定位于辅酶结合位点和每个亚基中的大β+α结构域之间的口袋中(Rowland等,)。这个口袋包含几个完全保守的氨基酸,包括一个八残基肽(Cosgroveetal.)。

分子特征:

L.mesenteroidesG6PD基因编码个氨基酸的多肽。G6PD的独特之处在于它不含半胱氨酸残基。已经确定了在生理条件下仅使用NADP+的人和大肠杆菌的序列。Z.mobili的序列与L.mesenteroides一样可以使用NADP+或NAD+,也已确定。这些物种中的任何两个之间大约有30-36%的序列同一性。一个保守的序列从Arg开始,并含有一个赖氨酸残基,被认为在葡萄糖-6-磷酸结合中起作用(Leeetal.)。

艾美捷Worthington葡萄糖-6-磷酸脱氢酶的特性:

分子量:,(LeeandHarpst;另见Mainetal.)

组成:Lee和Harpst()指出ButChE是一种四聚体结构,具有相同大小的,道尔顿的亚基。它是一种糖蛋白。主要等人。()已经确定了氨基酸和碳水化合物的组成,基于,的颗粒重量。另见Chiu等人。(年)和帕夫利奇(年)。

最佳pH值:6.0-8.0(Augustinsson)

消光系数:E=13.6(Mainetal.)

活化剂:Ca2+和Mg2+(Augustinsson)

艾美捷Worthington葡萄糖-6-磷酸脱氢酶的应用:

1.测量NADPH或NADH的系统(Bhattacharya和Ali)

2.葡萄糖和ATP(与HK偶联时)、果糖、6-磷酸葡萄糖、NAD(P)+和CK的测定

相关文献:

1.Anderson,W.和Nordlie,R.:酵母葡萄糖6-脱氢酶的葡萄糖脱氢酶活性。I.碳酸氢盐、磷酸盐和硫酸盐的选择性刺激,Biochemistry7,,

2.Balaguer,P.、Terouanne,B.、Eliaou,J.、Humbert,M.、Boussioux,A.和Nicolas,J.:使用葡萄糖6-磷酸脱氢酶作为核酸杂交反应的新标记,肛门生化,50,

3.Ben-Bassat,A.和Goldberg,I.:来自甲醇生长的假单胞菌c.的葡萄糖6-磷酸脱氢酶(NADP+/NAD+)和6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶(NADP+/NAD+)的纯化和性质。,BiochimBiophysActa,1,

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